色譜柱是一種用來改善在反相色譜中保留較差的強(qiáng)極性物質(zhì)保留行為的色譜技術(shù)。它通過采用強(qiáng)極性固定性，并且結(jié)合高比例有機(jī)相/低比例水相組成的流動(dòng)相來實(shí)現(xiàn)這一目的。而這樣的流動(dòng)相組成尤其有利于提高電噴霧離子化質(zhì)譜的靈敏度。
 

　　色譜柱的分離機(jī)制
 

　　分離機(jī)理在目前還存在著爭(zhēng)議，主要包括以下三個(gè)方面：
 

　　(1)分配機(jī)理
 

　　(2)離子交換
 

　　(3)偶極-偶極相互作用。更多的試驗(yàn)現(xiàn)象則表明HILIC色譜柱的保留機(jī)理包含氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等多種次級(jí)效應(yīng)，很難將其區(qū)分開來。
 

　　色譜柱影響保留的主要因素：
 

　　普遍認(rèn)為色譜柱保留行為受到多種參數(shù)的影響，如固定相的官能團(tuán)、有機(jī)改性劑的含量、流速、柱溫、流動(dòng)相緩沖體系的pH值、緩沖鹽的種類和濃度。
 

　　影響樣品在固定相上的保留行為的主要因素都是流動(dòng)相中有機(jī)相的比例，例如乙腈的含量的增加會(huì)顯著增加樣品的保留因子。在色譜柱分離模式中，溶劑洗脫能力由弱到強(qiáng)為：丙酮<乙腈<異丙醇<乙醇<甲醇<水, 流動(dòng)相中水是較強(qiáng)的洗脫溶劑。一般采用乙腈-水體系作為流動(dòng)相，其中水相的比例為5%-40%以保證其顯著的親水作用。將流動(dòng)相中的水相用甲醇、乙醇、異丙醇代替，隨著流動(dòng)相極性的減小，待測(cè)物在柱上的保留就會(huì)增強(qiáng)。